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辅酶Q10(CoQ10)检测试剂盒(微板法)

产品编号:4188229
包装规格:100T
产品类别:其他试剂盒
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4188229100T询价2-5天

辅酶 Q(Coenzyme Q,CoQ)是一种生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物,故又称泛醌,在体内呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用,是呼吸链中重要的递氢体,它是细胞呼吸和细胞代谢的激活剂,也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂。对多种酶有激活作用。不同生物体来源的辅酶 Q其侧链异戊烯单位的数目不同,人类和哺乳动物是 10个异戊烯单位,故称辅酶 Q10。辅酶 Q10是辅酶 Q类的重要成员之一,它们与线粒体内膜相结合,广泛参与体内的生物代谢过程。

辅酶 Q10不仅能给心脏提供动力,还具有**的抗氧化、清除自由基功能,能预防血管壁脂质过氧化,预防动脉粥样硬化,并且无任何毒副作用。具体作用体现在以下四个方面:

①帮助保护心脏辅酶 Q10有助于为心肌提供充足氧气,预防突发性心脏病,尤其在心肌缺氧过程中辅酶 Q10发挥关键性改善作用。

②保护皮肤长期使用辅酶 Q10能够有效防止皮肤衰老,减少脸部皱纹。

③抗疲劳辅酶 Q10使细胞保持良好健康的状态,因而机体充满活力,精力旺盛,脑力充沛。它是细胞自身产生的天然抗氧化剂和细胞代谢启动剂,具有保护和恢复生物膜结构的完整性、稳定膜电位作用,是机体的非特异性免疫增强剂,因此显示出极好抗疲劳作用。

④防癌抗癌研究表明,辅酶 Q10有抗肿瘤作用,临床对于晚期转移性癌症有一定疗效。

辅酶 Q10(CoQ10)检测试剂盒(微板法)其检测原理是待测样品在碱性条件下,EC取代了 CoQ10上的甲氰基,形成蓝色化合物,通过酶标仪测定 620nm处吸光度值,根据标准曲线即可测出辅酶 Q10的含量。本产品可用于测定花生、牛肉、沙丁鱼、保健品等食品中的 CoQ10的含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成:

试剂(A): CoQ10标准(5mg/ml)0.1ml-20℃避光
试剂(B): EC solution5mlRT避光
试剂(C): EC buffer25mlRT
试剂(D): CoQ10 Assay buffer5mlRT
使用说明书1份

自备材料:

1、无水乙醇、蒸馏水、三氯甲烷或正己烷等提取试剂

2、分光光度计或酶标仪、比色杯或 96孔板

操作步骤(仅供参考):

1、稀释标准品:用 EC buffer稀释 CoQ10标准(5mg/ml)至 0.5mg/ml,-20℃保存备用。

2、准备样品:

①新鲜动物心脏或肝脏样品:用醇碱皂化法、溶剂皂化法等提取适量的 CoQ10提取液,-20℃保存备用。

②动物血清样品:0.1ml血清加入 0.9ml三氯甲烷,持续摇动 30min以上,使 CoQ10充分提取出来。如果检测结果较低,可以降低三氯甲烷的加入量。

③保健食品:参考 GB/T 22252-2008 《保健食品中辅酶 Q10的测定》中样本的提取方法。具体如下:根据试样中 CoQ10含量,称取 1~5g均匀试样(精确至 0.001g),置于 25ml棕色容量瓶中,加正己烷 20ml,超声提取 20min后,加正己烷至刻度,摇匀,量取 1.0ml上述溶液于 10ml棕色容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,混匀,0.45μm滤膜过滤,滤液备用。

④酵母菌等发酵菌体样品:用醇碱皂化法提取,提取方法参考如下:

将湿菌体移入 150ml圆底烧瓶,加入 0.7g焦性没食子酸、2.5g氢氧化钾、19ml甲醇和7ml蒸馏水,混匀。90℃水浴锅中回流 30min,迅速冷却至室温,倒入分液漏斗中,加入石油醚(正己烷、三氯甲烷或丙酮)等有机溶剂 40ml,剧烈震荡 5min,萃取 CoQ10,连续萃取 2次,合并萃取液,用蒸馏水洗涤至中性,加入 5g无水硫酸钠干燥。用旋转蒸发仪 50℃浓缩至浓稠液,加入 10ml无水乙醇,放入冰箱冷冻析出胆固醇等杂质,过滤,滤液定容至 100ml待用。

3、CoQ10加样:按照下表设置空白、标准和测定,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的 CoQ10浓度过高,可适当减少样品用量或用 EC buffer稀释后再进行测定。

普通分光光度计(2ml比色杯) CoQ10测定
加入物(ml)空白管标准管测定管
EC buffer21.751.75
CoQ10标准(0.5mg/ml)0.25
待测样品(提取液)0.25
EC solution0.50.50.5
CoQ10 Assay buffer0.50.50.5
酶标仪 CoQ10测定
加入物(μl)空白孔标准孔待测孔
EC buffer200175175
CoQ10标准(0.5mg/ml)-25-
待测样品(提取液)--25
EC solution505050
CoQ10 Assay buffer505050

4、 CoQ10测定:混匀,室温避光孵育 3~5min,以空白管调零,比色杯光径 1cm,分光光度计或酶标仪 620nm(600~640nm亦可)处测定标准管或测定管的吸光度。

计算:

液体样品辅酶 Q10浓度:CoQ10(mg/ml)=A测定/A标准×0.5

液体样品辅酶 Q10含量:CoQ10(mg)= A测定/A标准×0.5×VT

每 100g固体样品辅酶 Q10含量:CoQ10(mg)= A测定/A标准×0.5×VT×100/m

式中:

A测定=测定管的吸光度

A标准=标准管的吸光度

0.5= CoQ10标准的浓度(mg/ml)

VT=CoQ10提取液的总体积(ml)

m=样品的实际用量(g)

注意事项:

1、待测样品中不能含有 CoQ10抑制剂,同时需避免反复冻融。

2、在皂化过程中,震荡不要剧烈,以免形成乳化层。

3、CoQ10 Assay buffer如果出现浑浊或絮状物,应弃用。

4、CoQ10标准梯度应准确,尽量减少不必要的误差。

5、EC solution有一定毒性,请小心操作。

6、检测标准品时,按步骤 3表格混合后,2min内即出现明显的蓝色变化并逐渐加深,20min后蓝色开始变浅,30min后逐渐呈黄绿色。630nm检测数据表明,随着时间的延长,OD值在不断的下降,对应的颜色也已发生变化,特别是高浓度的标准品变化比较大。因此,应在出现最深的蓝色结果且稳定的时间段内尽快检测,而且建议每次同时检测标准品 (0.3~0.5mg/ml)和样品。如有条件,**用酶标仪检测,减少因检测时间导致的误差。

7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6个月有效。

附一:参考标准曲线范围: Leagene测定 CoQ10标准 0.04、0.1、0.3、0.5、1、2、5mg/ml在 630nm的吸光度,据此做出其标准曲线如下:

附二:CoQ10的提取方法(来源于网络,仅供参考)方法一、醇碱皂化法皂化液的制备取猪心残渣,压干称重,按干渣重加 300g/L工业焦性没食子酸,搅匀,加醇-碱溶液(干渣重 3~3.5倍量乙醇、320g/L氢氧化钠),加热搅拌回流 25~30min,迅速冷却至室温,得皂化液。

浓缩液的制备取皂化液,立即加入其体积 1/10量的石油醚或 120号汽油提取 3~4次,搅拌,分层,得提取液。水洗至近中性,在 40℃以下浓缩至原体积的 1/10,冷却,-5℃以下静置过夜,过滤,得浓缩液。

辅酶 Q10精制品的制备将浓缩液过硅胶柱层析,先后用石油醚、10%乙醚-石油醚洗脱,收集洗脱液,回收溶剂,得黄色油状物。加热无水乙醇溶解,过滤,滤液静置,冷却结晶,真空干燥,得辅酶 Q10精制品。

方法二、醇醚混合溶剂提取法

辅酶 Q10粗制品的制备取猪心残渣,加 1.5倍量的 V乙醇:V乙醚=3:1混合溶剂,加热提取

3~4次,每次 15~20min,冷至室温,过滤,合并提取液。浓缩,加适量水,加石油醚提取,提取液浓缩,浓缩物为黄色油状物,即辅酶 Q10粗制品。

辅酶 Q10成品的制备取辅酶 Q10粗制品,加丙酮溶解,置-10℃以下析出杂质,过滤,滤液蒸去丙酮,加少量石油醚溶解,过硅胶柱层析分离,加无水乙醇结晶,得辅酶 Q10成品。

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