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苹果酸(L-MA)含量试剂盒(酶法-可见显色)

产品编号:4186362
包装规格:48样
产品类别:其他试剂盒
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418636248样11272-5天内发货货期3-4周

苹果酸(L-Malic acid)是三羧酸循环中的一个重要组分,存在于所有生物体中。

本试剂盒提供一种快速、灵敏的检测苹果酸的方法,利用苹果酸脱氢酶催化氧化苹果酸,同时使生成的 NADH进一步与显色剂反应生成有色物质,通过检测该有色物质在 450nm处的生成量即可得出苹果酸的含量。

试剂盒的组成和配制:

试剂名称

规格

保存要求

备注

提取液

液体 120ml×1瓶

4℃保存


试剂一

粉体 mg×1支

4℃保存

临用前甩几下使粉体落入底部,再加入 4.4ml蒸馏水充分溶解备用。

试剂二

粉体 mg×1支

4℃保存

临用前甩几下使粉体落入底部,再加入 5ml蒸馏水充分溶解备用。

试剂三

液体 ml×1支

4℃保存


试剂四

液体μL×1支

-20℃保存

临用前甩几下使微量液体落入底部,再加入 2.2ml蒸馏水充分溶解备用。

试剂五

液体 60ml×1瓶

4℃保存


试剂六

粉体 mg×1支

-20℃保存

临用前甩几下使粉体落入底部,再加入 2.2ml蒸馏水充分溶解备用。

标准品

液体×1支

4℃保存

原浓度是 100μmol/ml的 L-苹果酸,临用前用蒸馏水稀释 500倍,即 0.2μmol/ml标准品溶液备用检测。

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1ml玻璃比色皿(光径 1cm)、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

苹果酸(L-Malic acid)含量测定:

建议正式实验前选取 2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!

1、样本制备:

①组织样本:

取约 0.1g组织样本(水分含量高的样本建议取 0.5g左右),加 1ml提取液冰浴研磨,粗提液全部转移到 EP管中,12000rpm,4℃离心 10min,上清液待测。

②液体样品:澄清的液体样本直接检测,若浑浊则离心后取上清检测。

2、上机检测:

①可见分光光度计预热 30min以上,调节波长至 450nm,蒸馏水调零。

②标准品的稀释:原浓度为 100μmol/ml的 L-苹果酸,用蒸馏水稀释 500倍,即得待测标准品浓度为 0.2μmol/ml的 L-苹果酸。

③所有试剂需解冻至室温(25℃)。

④在 EP管中依次加入:

试剂名称(μL)标准管(仅做一次)空白管(仅做一次)测定管对照管
样本

8080
标准品80


试剂一40404040
试剂二40404040
试剂三20202020
试剂四20202020
试剂五500580500540
试剂六404040

混匀,37℃下避光孵育 30min,全部上清液转移至 1ml玻璃比色皿中,于 450nm下读取各管吸光值 A(若此时 A值增长较大,需延长反应时间,直至 A值不变),ΔA=A测定-A对照(每个样本做一个自身对照)。

【注】

1、若ΔA在零附近徘徊,可以增加样本加样量 V1(如增至 140μL,则试剂五相应减少),或增加样本取样量 W(如取样 0.2g),则改变后的 V1和 W需代入计算公式重新计算。

2、若样本中苹果酸含量过高,ΔA超过 1,则可对样本用蒸馏水或提取液进行稀释后再按照加样表测定,则稀释倍数 D需代入计算公式计算。

结果计算:

1、按照样本质量计算

苹果酸含量(nmoL/g鲜重)=
(C标准×V标准)×ΔA÷(A标准-A空白)÷(W×V1÷V) ×D= 200×ΔA÷(A标准-A空白)÷W ×D

苹果酸含量(μg/g鲜重)=
(C标准×V标准)×ΔA÷(A标准-A空白)÷(W×V1÷V)×Mr ×D=26.82×ΔA÷(A标准-A空白)÷W ×D

2、按照液体体积计算:

苹果酸含量(nmoL/ml)=
(C标准×V标准)×ΔA÷(A标准-A空白)÷V1×D=200×ΔA÷(A标准-A空白) ×D

苹果酸含量(μg/ml)=
(C标准×V标准)×ΔA÷(A标准-A空白)×Mr×D=26.82×ΔA÷(A标准-A空白) ×D

C标准---0.2μmol/ml=200nmol/ml; V---加入提取液体积,1 ml;V1---加入反应体系中样本体积,0.08ml; V标准---0.08ml;W---样本质量,g;苹果酸分子量 Mr---134.09;D---稀释倍数。

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