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细胞生长缓慢的原因解析
2023.07.11 点击4763次
一、培养体系问题
1、检查细胞是否存在污染。
(1)如果培养细胞时未添加抗生素,细胞污染则是不可避免的。
①用肉眼和显微镜进行检查。
②如果细胞被污染则要弃掉。
(2)支原体污染不易察觉,因此需要进行定期检测。
(3)检查可能造成污染的途径和原因。
2、检查用于培养细胞的培养基和血清(例如批次厂商是否相同)。
3、如果排除问题与培养基无关,那么可能还是细胞存在问题。
(1)复苏另一支冻存的细胞,与正在培养的细胞进行比较。但是需要注意的是两种细胞的培养应分开,以免在培养之初就产生污染。随后按步骤(2)~(4)的方法做排查。
(2)对传代培养的细胞进行计数,并绘制生长曲线,与前面培养该细胞的资料进行比较,检查是否存在如下改变:
①传代时是否存在接种密度过低的情况。
②细胞传代是否过于频繁。
③传代前细胞平台期是否过长。
(3)是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批次,检查供应商和批次。
(4)细胞分离过程中是否出现严重损伤细胞的情况:
①胰蛋白酶(或其他消化试剂)的消化时间是否过长。
②消化液的浓度和活性是否过高、过强。
③胰蛋白酶消化时,孵箱温度是否正常。
④吹打消化细胞时是否过于用力。
⑤如果添加了EDTA,那么细胞是否对 EDTA过于敏感。
⑥胰蛋白酶稀释是否正确。
⑦胰蛋白酶消化液是否还在有效期内。
二、检查公用设备和试剂
1、孵箱温度设定不准
a、自动调温器损坏。
b、开关孵箱门过于频繁。
c、孵箱门未关紧。
d、风扇损坏造成散热不均。
2、孵箱湿度不能维持
a、水盘中未加水。
b、孵箱有渗漏。
c、开关孵箱门过于频繁。
d、在培养皿中放置一定量的PBS,每日称重,以检查蒸发率。
3、孵箱的CO2浓度不准
a、开关孵箱门过于频繁。
b、CO2控制器出现问题。