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葡萄糖(HK)检测试剂盒产品说明书
2020.03.11   点击430次

(本中文说明书为翻译稿,仅供参考,应以英文版为准)

货号:3091315 (Sigma-Aldrich : GAHK20)

储存温度:2-8℃

产品描述:

作为分析工具的酶已在食品,生化和制药行业中得到广泛使用。酶法具有特异性高,可重现性好,灵敏度高,反应快速的特点,因此是分析的理想选择。由于酶的高度特异性和敏感性,因此可以在几乎没有样品制备或没有样品制备的情况下,对粗物质进行定量测定食品和其他材料中的葡萄糖。

葡萄糖(HK)检测试剂盒用于食品和其他材料中葡萄糖的定量、酶法测定。该试剂盒已应用于不同的系统以进行与下列课题有关的研究:

·HEK细胞中的肝葡萄糖和脂质平衡4

·产妇肥胖模型5

·纤维素酶燃料电池转化6

原理:

在己糖激酶催化的反应中,葡萄糖被三磷酸腺苷(ATP)磷酸化。然后,在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)存在下,在6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)催化的反应中,将6-磷酸葡萄糖(G6P)氧化为6-磷酸葡萄糖酸。在该氧化过程中,等分子量的NAD被还原为NADH。因此在340nm处吸光度的增加与葡萄糖浓度成正比。

注意事项和免责声明:

本试剂仅供科研使用,不能用于药品、家庭以及其他用途。有关危险和安全操作规程的信息,请参阅安全数据表。

试剂盒组成:

1、葡萄糖(HK)检测酶试剂

• 用20ml水溶解小瓶内粉剂。

• 加水后,立即盖紧瓶塞,并反转混匀数次。

• 不可震动。

• 加20ml水溶解后,每瓶溶液含有1.5 mM NAD,1.0 mM ATP,1.0 U/ml G6PDH;并含有防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾。

小瓶粉剂保存于2-8℃。出现以下情况应丢弃试剂:

• 小瓶粉剂受潮结块。

• 加水后不能充分溶解。

• 水溶液出现浑浊。

在没有可见的微生物生长的情况下,试剂水溶液比较稳定。在18–26℃下保存7天,在2–8℃下至少保存4周。以水作为空白参照,如果新配制的溶液在340nm处的吸光度大于0.350,则该试剂溶液不适合使用。

2、葡萄糖标准溶液

• D-葡萄糖,1.0 mg/mL溶于0.1%的苯甲酸。

• 即用型标准溶液,符合NIST(美国国家标准技术研究所标准)标准。

• 在2-8℃稳定至少六个月。

• 如果出现混浊,请丢弃。

仪器:

1、分光光度计:可在340nm下测定吸光度。

2、量杯。

3、移液器:能够准确分配10 μL至1.0 mL的体积。

操作步骤:

样品制备:

液体:

• 用去离子水将样品稀释至葡萄糖浓度为0.05-5mg/mL。

• 如有必要,对溶液进行过滤或去蛋白处理以使其澄清。

• 样品葡萄糖含量较低且颜色较深时,应予以脱色处理。

• 含碳酸或发酵样品,须脱气处理。

固体:

• 称量0.1mg样品。

• 用去离子水提取样品。可以将溶液加热(<75℃)以帮助萃取。

• 用去离子水稀释提取液品至葡萄糖浓度为0.05-5mg/mL。

• 如有必要,对溶液进行过滤或去蛋白处理以使其澄清。

测定

• 吸取相当于0.5-50μg葡萄糖的溶液。

• 为使ΔA340在0.03-1.6之间,必要时可重复测定并改变溶液体积。

• 将以下溶液吸取到相应的试管中。

试管葡萄糖检测试剂(ml)样品体积(μl)去离子水(ml)
空白样品-同测试1.0
空白试剂1.0-同测试
测试1.010-200-

• 混匀各试管,在室温(18-35℃)下孵育15分钟。

• 用去离子水调零,测量340nm吸光度。

计算

总空白必须考虑到样品和葡萄糖测定试剂对吸光度的影响。

 ATotal Blank = ASample Blank + AReagent Blank

 ΔA = ATest –ATotal Blank

TV = 总检测体积 (mL)

SV = 样品体积 (mL)

葡萄糖分子量 = 180.2 g/mole 或等效于 180.2 g/moles

F = 制样稀释倍数

ε= NADH 在340nm处的毫摩尔消光系【毫摩尔-1 cm-1 或等效于 (mL/μmoles)(1/cm)】

d = 光径 (cm) = 1 cm

1,000 = 微克到毫克的换算系数

参考文献:

1、Bondar, R.J.L., and Mead, D.C., Clin、Chem., 20(5), 586-590 (1974).

2、Kunsst, A、et al., Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition (H.U、Bergmeyer, ed.)、Academic Press (New York, NY), Vol、2, pp、163-172 (1984).

3、Southgate, D.A.T., Determination of Food Carbohydrates、Applied Science Publishers (London, UK: 1976).

4、Cheng, Y.-S、et al., PLoS Genet., 11(10), e1005561 (2015).

5、Chen, J.-R、et al., Endocrinology, 157(11), 4172-4183 (2016).

6、Chen, Q、et al., J、Biotech., 263, 30-35 (2017).

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