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Tris缓冲溶液的优缺点
2019.03.12   点击72次

缓冲溶液是一类能够抵制外界少量强酸和强碱的影响,维持体系pH值基本不变的溶液,其在生物化学的研究工作中有着极为重要的意义。常用的生物化学缓冲溶液有Tris(羟基甲基氨基甲烷)缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、有机酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、氨基酸缓冲液以及两性离子缓冲液。

Tris初次引起广泛注意的商业的成功之一是在鱼的运输时降低了鱼的死亡率。在20世纪40年代,活鱼是在盛有海水的桶里运往市场的。不幸的是,许多鱼因C02的积聚使pH下降而致死。为了解决这个问题,在水中加入麻醉剂以便使鱼的代谢活动降至最低限度,即使这样也只能部分地得到缓解。这些麻醉剂对那些吃了这种鱼的人到底有什么作用没有记载。1958年,McFarland和Norris在海水中加入Tris稳定其pH,的确降低了鱼的死亡率。Tris有很高的缓冲能力,在水中溶解度高,对很多酶反应是惰的,Tris也成了用于许多生化目的非常满意的缓冲液,也是目前用于分子克隆中大多数酶反应的标准缓冲液。

Tris有很高的缓冲能力,在水中高度溶解,对很多种酶反应是惰性的。但是,Tris也有许多不足之处:

1、Tris的pKa值是pH8.0(20℃),这就意味着在pH值小于7.5和大于9.0时,Tris的缓冲能力是非常低的。

2、温度对Tris的解离有显著影响。温度每升高l℃,Tris溶液的pH值则降低约0.03pH单位。例如,0.05mol/LTris在5℃,25℃,37℃时,其pH值分别为9.5,8.9和8.6。科学文献中Tris溶液的pH指的是在25℃测定的pH。配制Tris的贮存液时,最好是将pH调到所希望的范围,然后使之冷却至25℃再进行最终校正。

3、Tris与许多类型含有亚麻纤维接头的pH电极起反应,显然Tris能与亚麻纤维起反应。这种影响表现在电动势(emf)漂移,平衡时间加长。因此,具有亚麻纤维接头的电极不能精确测定Tris溶液的pH值。只能使用具有陶瓷或玻璃接头的电极测定Tris溶液的pH值。

4、浓度对Tris解离有显著影响。例如,10mmol/L和100mmol/L Tris溶液的pH值会相差0.1pH单位,溶液的浓度越大则其pH值越高。

5、Tris对许多哺乳动物有毒性。

6、Tris作为伯胺,不能用于像戊二醛和甲醛这样的固定剂。Tris也与乙二醛反应。通常用磷酸盐或MOPS缓冲液替代Tris,用于这些试剂。


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